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    產品詳情
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    人B-淋巴細胞趨化因子ELISA檢測試劑盒

    描述:人B-淋巴細胞趨化因子ELISA檢測試劑盒 品牌 韻泰 規格 96T/48T 檢測方法 酶聯免疫法 適用物種 大鼠 樣本 血清/血漿/尿液/組織 應用 僅供體外科研實驗研究使用,嚴禁用于臨床診斷 保存 2-8° 貨號 YT30472 運輸方式 快遞(低溫) 保質期 6個月 產品特點 特異性強、靈敏度高。

    更新時間:2021-12-29
    產品型號:48T/96T
    廠商性質:經銷商
    詳情介紹

     

    商品介紹

    人B-淋巴細胞趨化因子ELISA檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)使用說明書
    僅供科研實驗研究使用,嚴禁用于臨床診斷!
    l本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織勻漿及相關液體樣本中人B-淋巴細胞趨化因子ELISA檢測試劑盒
    l有效期:6個月
    l保存條件:2-8℃
    [實驗原理]
    試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被 人B-淋巴細胞趨化因子1(BLC-1/CXCL13)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的 人B-淋巴細胞趨化因子1(BLC-1/CXCL13) 呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。
    [樣本處理及要求]
    1.  血清:將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置2小時或4℃過夜,然后1000×g離心20 分鐘,取上清即可,或將上清置于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
    2.  血漿:用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本,并將標本在采集后的30分鐘內于2-8℃ 1000×g離心15分鐘,取上清即可檢測,或將上清置于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
    3.  組織勻漿:用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果),稱重后組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對應9mL的PBS,具體體積可根據實驗需要適當調整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞,可以對勻漿液進行超聲破碎,或反復凍融。最后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測。
    4.  細胞培養物上清或其它生物標本:請1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將上清置于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
    注:標本溶血會影響最后檢測結果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。
    [需要而未提供的試劑和器材]
    1.酶標儀(450nm)
    2.高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
    3.37℃恒溫箱
    4.蒸餾水或去離子水
    [試劑盒組成]


    備注:
    1.  標準品濃度依次為:12、6、3、1.5、0.75、0.375 ng/mL。
    2.  經過大量正常標本檢驗,標本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內,實驗過程中直接取50μL樣本上樣即可。當有部分樣本值超過標準品濃度時,可用樣本稀釋液將標本進行適當稀釋后再進行實驗。
    [注意事項]
    1)試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
    2)實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。
    3)不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
    4)使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。
    5)使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
    6)洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
    7)底物A應揮發,避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
    8)加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
    9)按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
    [試劑準備]
    試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡后方可使用。
    20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。
    [操作步驟]
    1)使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產生加樣上的誤差。
    2)根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應孔內。
    3)加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。
    4)甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
    5)每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
    6)甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
    7)每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。
    8)取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果。
    9)在450nm波長處測定各孔的OD值。
    [實驗結果計算]
    以所測標準品的OD值為橫坐標,標準品的濃度值為縱坐標,在坐標紙上或用相關軟件繪制標準曲線,并得到直線回歸方程,將樣品的OD值代入方程,計算出樣品的濃度。
    [試劑盒性能]
    1. 檢測范圍:0.375 ng/mL – 12 ng/mL。
    2. 靈敏度:檢測濃度小于0.1 ng/mL。
    3. 特異性:不與其它可溶性結構類似物交叉反應。
    4. 重復性:板內變異系數小于10% ,板間變異系數小于15% 。



     

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